HPV基因分型检测介绍

人乳头瘤病毒基因分型检测

INNO-LiPA HPV Genotyping

一、临床背景

人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）是一种嗜上皮性病毒，在人和动物中分布广泛，有高度的特异性，长期以来，已知HPV可引起人类良性的肿瘤和疣，如生长在生殖器官附近皮肤和粘膜上的人类寻常疣、尖锐湿疣以及生长在粘膜上的乳头状瘤。自从1976年Harald zur Hausen提出HPV可能是性传播致癌因素以来，HPV感染与宫颈癌关系的研究成为肿瘤病毒病因研究的热门课题。

HPV是一组病毒的总称，组成一个科，其病毒形态类似，但DNA限制性内切酶图谱各异，核壳体蛋白质的抗原性不同。目前已经确定的HPV型别大约有80余种，依其感染的上皮所在部位分为皮肤型HPV和生殖道上皮HPV，大约35种型别可感染妇女生殖道，约20多种与肿瘤相关。依据不同型别HPV与肿瘤发生的危险性高低分为低度危险性型HPV和高度危险性型HPV。低度危险性型HPV包括：HPV 6，11，34，40，42，43，44，53，54，70及74等型，常引起外生殖器湿疣等良性病变包括宫颈上皮内低度病变（CIN I）。高度危险性型HPV包括：HPV 16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66及68等型，与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变（CIN II/III）的发生相关，尤其是HPV 16和18型。

二、试剂用途

INNO-LiPA HPV Genotyping检测是一种线性探针检测方法，可以准确鉴别人乳头瘤病毒至少25种相关的人乳头瘤病毒基因型。

三、检测方法及原理

INNO-LiPA HPV Genotyping是基于反向探针杂交的原理。 通过PCR反应扩增的HPV基因组L1区，与以平行线形式固定在薄膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后， 未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。加入标记有碱性磷酸酶的链霉抗生物素蛋白（链亲和素），与杂交产物上标记的生物素结合。随后加入BCIP/NBT显色底物，显现紫色。结果可用肉眼判断。

四、检测特点

1. 人乳头瘤病毒的各型与其致病危险性有关：

HPV 6，11，34，40，42，43，44，53，54，70及74型被认为是低度危险性型；HPV 16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66及68被认为是高度危险性型^[1]。

2. 可靠鉴别患者的持久HPV感染^[2]。

3. 检测监控个别患者的HPV感染^[3,4]。

4. 各种HPV型混合感染，在HPV阳性的女性中发生率为25-30%^[5]；并可增大其发展为颈部肿瘤的危险性^[6,7]。

5. 酶标记物对照线是显色反应的对照，扩增反应对照线包括通用HPV探针以检测扩增的HPV产物的存在。

6. 与同类检测试剂比较，具有检测时间短，操作简单，结果准确的优点。并可作为确诊试剂，便于质控和标准化操作。

7. 手工操作，肉眼直观判定结果。

五、检测步骤及时间

※扩增后总检测时间2小时30分钟。

参考文献

1. Zur H. Papillomavirus infections-a major cause of human cancers. Biochim Biophs Acta 1996;1288:F55-F78.

2. Kleter G, et al. A novel short-fragment PCR assay for highly sensitive broad-spectrum detection of anogentital human papillomaviruses. Am J Pathol 1998;153:1731-1739.

3. Innis B, et al. HPV -16/18 infection prevalence in women screened for a prophylactic vaccine study in Brazil and North America. 19th Interna-tional Papillomavirus Conference; 2001, Florianopolis, Brail (abstract O116).

4. Melchers WJ, et al. Short fragment polymerase chain reaction reverse hybridization line probe assay to detect and genotype a broad a spectrum of human papillomavirus types. Clinical evaluation and follow-up. Am J Pathol 1999 Nov;155(5):1473-8.

5. Kleter G,et al. Development and clinical evaluation of a highly sensi-tive PCR-reverse hybridization line probe assay for detection and identification of anogenital human papillomavirus. J Clin Microbiol 1999;37:2508-2517.

6. Morrison E, et al. Human papillomavirus infection and other risk factors for cervical neoplasia : a case-control study. Int J Cancer 1991;49:6- 13.

7. Van der Graaf Y, et al. Human Papillomavirus and the long-term risk for cervical neoplasia. Am J Epidem 2002; in press.